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在生物化学、制药研发和分子诊断领域，当我们提到“生物素消光系数”时，这通常不是一个直接描述生物素本身性质的参数，而是指与生物素相结合的那些用于检测的标记物——尤其是链霉亲和素（Streptavidin）或亲和素（Avidin）上结合的生物素化分子（如生物素化蛋白、生物素化抗体或生物素化寡核苷酸） 的消光系数。
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首先，我们需要明确一个关键点：游离的小分子生物素（维生素H）本身在280纳米（nm）附近几乎没有吸收，因此其摩尔消光系数极低，通常不被讨论。
我们常说的“生物素消光系数”，实际上是指被生物素标记的生物大分子（如蛋白质、DNA）的消光系数。生物素作为一个标签，其价值在于它能与链霉亲和素发生超高亲和力的结合。而我们需要定量的是那个“被标记的分子”。
由于“生物素化分子”千变万化，不存在一个统一的“生物素消光系数”。但是，我们可以通过以下几种方式获得或计算所需的数值。
1. 直接参考：生物素酰化标签的消光系数
一些公司会提供他们常用的生物素化标签（如生物素化肽段）的消光系数。例如，某些序列的消光系数在280 nm处可能给出一个参考值。但请务必注意，这仅适用于该特定标签，不能推广到所有生物素化分子。
2. 核心计算方法：计算生物素化蛋白的消光系数
对于最常见的生物素化抗体或生物素化酶，其消光系数主要由蛋白质本身决定。生物素标签的贡献微乎其微，可以忽略不计。因此，我们计算的是该蛋白质的消光系数。
最准确和常用的方法是利用蛋白质的氨基酸序列进行计算。蛋白质在280 nm处的吸光主要由色氨酸（Trp）和酪氨酸（Tyr）残基贡献，半胱氨酸（Cys）也有微弱贡献。
计算公式如下：ε(280 nm) = (Num\_Trp × 5500) + (Num\_Tyr × 1490) + (Num\_Cys × 125)
ε(280 nm)：蛋白质在280 nm处的摩尔消光系数（M⁻¹cm⁻¹）。Num_Trp， Num_Tyr， Num_Cys：分别代表蛋白质序列中色氨酸、酪氨酸和半胱氨酸（形成二硫键的）的数量。示例计算：
假设一个抗体片段含有4个Trp， 6个Tyr， 2个形成二硫键的Cys。
则其摩尔消光系数 ε = (4 × 5500) + (6 × 1490) + (2 × 125) = 22000 + 8940 + 250 = 31190 M⁻¹cm⁻¹。
如果知道蛋白质的分子量（MW），还可以进一步计算出质量消光系数（A₁%）。A₁% = ε / MW
假设该抗体片段的分子量为50,000 Da，则其质量消光系数 A₁% = 31190 / 50000 ≈ 0.624。这意味着浓度为1 mg/mL的该蛋白溶液，预计在280 nm处的吸光度约为0.624。
获取消光系数后，它的主要用途是通过紫外分光光度法对生物素化分子进行精确定量。
实验步骤：