蛋白质生物素化是生物化学和分子生物学研究中一项重要的实验技术,通过将生物素共价连接到蛋白质上,为后续的实验应用提供便利。本文将全面介绍蛋白质生物素化的原理、方法和优化策略,帮助您掌握这一关键技术。

蛋白质生物素化是指在特定条件下将生物素分子共价连接到蛋白质上的过程。生物素,也称为维生素B7或维生素H,是一种小分子水溶性维生素,与链霉亲和素或亲和素具有极高的亲和力(Kd≈10^-15 M),这种结合是目前已知最强的非共价生物相互作用之一。
生物素化的蛋白质在多种实验技术中发挥重要作用,包括:

化学生物素化是最常用的方法,利用生物素衍生物与蛋白质中特定氨基酸残基的反应性基团进行连接。
常用试剂:

酶法生物素化利用生物素连接酶(如BirA酶)在特定序列上标记生物素,具有高度特异性。
常用系统:

酶法生物素化的主要优势:
基本要求: