蛋白质生物素化是生物化学和分子生物学研究中一项重要的技术,广泛应用于蛋白质检测、纯化和相互作用研究。本文将深入解析蛋白质生物素化的四种主要反应方法,帮助研究者全面了解这一技术。
蛋白质生物素化是指在蛋白质分子上共价连接生物素(biotin)的过程。生物素,又称维生素B7或维生素H,是一种水溶性维生素,与亲和素(avidin)或链霉亲和素(streptavidin)具有极高的亲和力(Kd≈10^-15 M)。这种特异性结合能力使生物素化蛋白质在多种实验应用中极为有用。

原理:
利用N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯化的生物素试剂与蛋白质中赖氨酸残基的ε-氨基之间的反应。

常用试剂:
反应条件:
优点:
缺点:
应用:
适用于大多数蛋白质的随机标记,特别是当精确标记位点不是关键因素时。

原理:
利用马来酰亚胺基团与蛋白质中半胱氨酸残基的巯基(-SH)之间的特异性反应。
常用试剂:

反应条件: