500生物素怎么配

首先，您搜索的“500生物素”通常指的是500 μM（微摩尔/升）的生物素溶液。这是一种在分子生物学和细胞培养实验中非常常用的工作浓度。

如何配制500 μM生物素溶液（以PBS为例）

生物素（Biotin，又称维生素H或维生素B7）通常以粉末形式出售。配制溶液的关键在于了解它的分子量和溶解度。

1. 核心信息：

• 生物分子量： 244.31 g/mol
• 常用溶剂： 生物素可溶于水、PBS缓冲液、DMSO（二甲基亚砜）等。对于大多数细胞实验，使用PBS（磷酸盐缓冲盐水）或去离子水配制是安全且常见的选择。
• 注意事项： 生物素溶液配好后，建议用0.22 μm的滤膜过滤除菌，然后分装保存于-20°C，避免反复冻融。

2. 配制步骤：

第一步：计算所需质量
要配制1升（1000 mL）500 μM的生物素溶液，需要以下计算：

• 摩尔数 = 浓度 × 体积 = 500 × 10⁻⁶ mol/L × 1 L = 0.0005 mol
• 所需质量 = 摩尔数 × 分子量 = 0.0005 mol × 244.31 g/mol = 0.122155 克

在实际操作中，我们通常不会配制如此大的体积。更常见的做法是配制50 mL或100 mL。计算公式是通用的：

所需质量（mg） = 目标浓度（μM） × 目标体积（L） × 分子量（g/mol）

以配制100 mL（0.1 L）500 μM生物素溶液为例：
所需质量 = 500 μM × 0.1 L × 244.31 g/mol = 12.2155 mg

结论： 精确称取约 12.22 mg 的生物素粉末。

第二步：实际操作

1. 准备器材： 分析天平（万分之一）、烧杯（50-100mL）、量筒（100mL）、玻璃棒、pH试纸（必要时）、容量瓶（100mL）、灭菌的离心管（用于分装）。
2. 称量： 使用分析天平，精确称取约12.22 mg的生物素粉末。
3. 溶解： 将称好的粉末放入烧杯中，加入约80 mL的PBS缓冲液（或去离子水），用玻璃棒轻轻搅拌直至完全溶解。
4. 定容： 将溶液全部转移至100 mL容量瓶中，用少量PBS多次冲洗烧杯和玻璃棒，并将冲洗液也倒入容量瓶，最后用PBS定容至100 mL刻度线，混匀。
5. 除菌与保存（可选但强烈推荐）： 用0.22 μm的 syringe filter（针头式滤器）将溶液过滤到一个无菌的容器中。然后将无菌溶液分装到多个无菌的小离心管中（例如，每管1 mL）。
6. 标签： 在管子上标记清楚“生物素 500 μM”、“配制日期”、“配制人”。
7. 储存： 置于 -20°C冰箱 冷冻保存。使用时取出一管，避免反复冻融。

常见问题与注意事项（FAQ）

1. 我应该用水还是PBS还是DMSO来溶解？

• PBS/水： 适用于大多数细胞培养实验（如培养基添加物）、与链霉亲和素（Streptavidin）的结合反应等。这是最通用和安全的选择。
• DMSO： 如果生物素是修饰过的（如脂溶性生物素衍生物），可能需要先用DMSO溶解成高浓度的储存液（如10 mM），然后再用PBS或培养基稀释到500 μM的工作浓度。注意： 最终工作液中DMSO的浓度通常不能超过0.1%（v/v），否则会对细胞产生毒性。

2. 浓度单位“μM”是什么意思？“500x”又是什么？

• μM（微摩尔/升）： 是浓度单位，表示每升溶液中含有多少微摩尔的溶质。这是标准科学的表示方法。您搜索的“500”极大概率是指500 μM。
• 500x： 这是指“500倍浓缩液”。意思是，当你取1 mL的此浓缩液，加入到499 mL的溶剂中，才能得到1x的工作浓度。这完全是另一个概念。在配制前，请务必确认实验方案要求的是 “500 μM” 还是 “500x”。

3. 粉末溶解不了怎么办？
生物素在水中的溶解度约为0.02 g/mL（约80 mM），因此配制500 μM（即0.5 mM）的浓度是完全没有问题的，很容易溶解。如果遇到困难，可以稍加温热（如37°C水浴）或超声助溶。

4. 配制好的溶液能保存多久？
过滤除菌并分装冻存于-20°C后，通常可以稳定保存6个月到1年。如果溶液出现浑浊或沉淀，则应丢弃不再使用。

5. 需要调pH吗？
对于常规应用，使用PBS（pH通常为7.4）配制即可，无需额外调整pH。如果您的实验对pH有特殊要求，请在溶解后用稀NaOH或HCl小心调节。

总结

配制500 μM生物素溶液是一个简单的过程：

1. 确认需求：明确是500 μM而不是500x。
2. 精确计算：根据目标体积，计算所需生物素粉末的质量（公式：质量=500 × 体积(L) × 244.31）。
3. 选择溶剂：通常选择PBS缓冲液或去离子水。
4. 规范操作：精确称量、充分溶解、定容、过滤除菌、分装、冷冻保存。