在维生素检测、食品营养分析和药品质量控制等领域，微生物法因其高特异性和灵敏度，被广泛用于生物素等B族维生素的定量分析。而整个测定过程的基石，便是绘制一条准确、可靠的“生物素标准曲线”（简称“标线”）。无论您是实验室新手还是需要重温知识的资深研究员，本文将全面解析微生物法测定生物素标线的全过程、关键要点和常见问题解决方案。
微生物法基于这样一个原理：特定微生物（如 Lactobacillus plantarum 阿拉伯乳杆菌）的生长繁殖速度与其培养环境中生物素的浓度在一定范围内呈正相关。菌群越旺盛，代谢产生的酸越多，通过滴定或测pH值来间接测定酸度，即可用吸光度值表示。
然而，我们无法直接从一个样品管的吸光度读数得到其生物素含量。标准曲线的作用就是建立一条“吸光度值”与“生物素浓度”之间的数学换算关系。只要测出未知样品的吸光度值，代入这条曲线的公式，就能精确计算出其生物素含量。
1. 核心材料与试剂准备
2. 标准储备液与工作液配制
3. 浓度梯度设置 一个典型的标线至少应包含5-7个浓度点，并设置一个“零浓度”管（不含生物素）作为空白对照。浓度范围应覆盖预计的样品浓度。例如：
4. 接种与培养
5. 测定吸光度值与数据处理
1. 绘制散点图 以生物素浓度的对数值（log(浓度)） 为横坐标（X轴），以校正后的吸光度值（OD） 为纵坐标（Y轴），在坐标系中描点。
2. 拟合回归方程 微生物生长曲线通常呈“S”形，但在中间一段范围内具有良好的线性关系。我们应选取线性部分的数据点进行拟合。使用统计软件（如Excel）进行线性回归分析，得到一条标准曲线和其回归方程：Y = aX + b。
3. 计算未知样品浓度 测定未知样品的OD值，经空白校正后得到Y值，代入回归方程：X = (Y - b) / a 计算出的X值是浓度的对数值，再通过10^X计算，即可得到样品中生物素的实际浓度。最后还需乘上相应的稀释倍数，得到原始样品的含量。
注册账号 | 忘记密码
