2-亚氨基生物素凝胶是一种专门用于亲和层析的分离介质,其主要成分是2-亚氨基生物素(2-iminobiotin)共价偶联到琼脂糖凝胶基质上。2-亚氨基生物素是生物素的结构类似物,与亲和素(avidin)或链霉亲和素(streptavidin)具有独特的pH依赖性结合特性,这一特性使其在生物分离纯化领域具有重要价值。
2-亚氨基生物素与亲和素/链霉亲和素的结合能力高度依赖pH环境。在碱性条件下(pH 9-11),2-亚氨基生物素能够与亲和素高效结合;而在中性或弱酸性条件下(pH 4-6),这种结合会大幅减弱甚至完全解离。
这一特性与传统生物素-亲和素系统有显著不同:传统生物素-亲和素结合是已知最强的非共价相互作用之一(Kd ≈ 10^-15 M),结合后极难解离,需要剧烈条件(如8M GuHCl,pH 1.5)才能分离。而2-亚氨基生物素系统则提供了一种温和的可逆结合方法,只需简单调节pH值即可完成结合与洗脱过程。
2-亚氨基生物素凝胶广泛应用于生物素标记蛋白质、核酸及其他分子的分离纯化。研究人员可以利用这种介质特异性捕获生物素化分子,然后通过温和的pH变化进行洗脱,保持目标分子的生物活性。
由于2-亚氨基生物素对亲和素家族蛋白的特异性结合,该凝胶可直接用于从各种样品来源中纯化亲和素和链霉亲和素,比传统方法更加高效温和。
在细胞生物学研究中,生物素-亲和素系统常用于标记和分离细胞表面受体。2-亚氨基生物素凝胶提供了一种温和的替代方案,特别适用于保持细胞膜蛋白的天然构象和功能。
该介质可用于研究蛋白质-蛋白质相互作用,特别是那些涉及生物素-亲和素系统的过程,为药物开发和基础生物学研究提供工具。
使用后的凝胶可用pH 9.5的缓冲液平衡后直接重复使用多次。长期储存建议在4°C条件下,置于含20%乙醇的溶液中防止微生物生长。
选择2-亚氨基生物素凝胶时应考虑以下因素:
市售产品通常提供预装柱和散装凝胶两种形式,研究者可根据实验规模和频率选择适合的包装规格。