如果您在实验中发现无法解释的背景信号，或者在查阅文献时看到“内源生物素干扰”的字眼，那么您找对地方了。本文将深入探讨细胞中内源生物素的存在、影响及解决方案，助您扫清实验道路上的障碍。
答案是肯定的。
哺乳动物细胞（包括人类、大鼠、小鼠等）自身能够合成生物素，并将其作为辅酶用于关键的代谢过程。因此，内源生物素是真实且普遍存在的。它主要存在于细胞的特定部位，尤其是线粒体和细胞质中。
需要注意的是，内源生物素的含量和分布具有组织特异性和细胞特异性。这意味着在某些组织和细胞类型中，它的含量会特别高，极易导致实验干扰。
了解这一点对实验设计至关重要。以下是一些内源生物素含量较高的“高风险”组织和细胞：
如果您的研究对象是上述组织或细胞，那么在采用生物素-链霉亲和素检测系统时，必须将内源生物素的干扰纳入考量。
其干扰主要发生在利用生物素-链霉亲和素（Biotin-Streptavidin）放大系统的实验技术中。这个系统因其极高的亲和力而被广泛应用于：
干扰机制非常简单： 实验过程中，我们会加入带有生物素标记的二抗，然后再加入链霉亲和素-酶（如HRP）或荧光素标记的链霉亲和素进行检测放大。然而，链霉亲和素无法区分“实验加入的生物素标记”和“细胞自身的内源生物素”。它会一视同仁地结合上去，从而导致：
幸运的是，有多种成熟可靠的策略可以解决这个问题：
1. 封闭（Blocking）—— 最常用且有效的方法 这是处理内源生物素干扰的标准流程。在加入链霉亲和素检测试剂之前，先用未标记的链霉亲和素（Streptavidin） 孵育样本，让其饱和结合所有内源生物素位点。随后，再加入游离的生物素（Biotin） 来饱和封闭液中链霉亲和素上的剩余结合位点。经过这两步封闭后，后续加入的标记型链霉亲和素就找不到可结合的内源生物素了，从而大大降低背景。
2. 选择无需生物素放大系统的替代方案 这是从根源上避免问题的方法。
3. 热诱导表位修复（Heat-Induced Epitope Retrieval, HIER） 一个有趣的技巧是，在IHC实验中，常用的柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）或EDTA缓冲液（pH 8.0-9.0）进行抗原热修复的同时，也能有效地破坏生物素-链霉亲和素间的结合。因此，标准的抗原修复步骤本身就能在一定程度上降低内源生物素的干扰。如果干扰依然存在，再结合上述的封闭方法。
4. 设立严谨的对照 这是判断是否存在干扰的金标准。
除了给实验带来麻烦，内源生物素在细胞中扮演着至关重要的角色。它是多种羧化酶（Carboxylases） 的必需辅酶，参与包括糖异生、脂肪酸合成和氨基酸代谢在内的核心代谢途径。简单来说，它是细胞能量代谢和物质合成的“关键助手”。因此，它的存在是生命活动所必需的。
注册账号 | 忘记密码
