在生物医学研究,尤其是流式细胞术、细胞分选和免疫染色等领域,生物素-链霉亲和素系统因其近乎不可逆的高亲和力而被广泛应用。然而,一个常见的问题是:“不表达生物素受体的是什么?” 这个问题的背后,通常隐藏着研究者们几个核心的关切点。本文将系统性地解答哪些细胞或生物系统不表达内源性生物素受体,并深入探讨其背后的原因及应对方案。
首先,需要明确一个关键概念:在标准细胞生物学中,并不存在一种专门被称为“生物素受体”的蛋白质。
因此,用户搜索“不表达生物素受体”,其真实意图通常是:“哪些细胞缺乏内源性的生物素或生物素化蛋白,从而不会在实验中与链霉亲和素试剂发生非特异性结合,造成背景干扰?”
绝大多数哺乳动物细胞都拥有上述的生物素转运系统,因为它们需要摄取生物素来生存。真正“不表达”这些转运蛋白的细胞几乎无法存活。然而,在实验背景下,我们关注的是内源性生物素水平低、不会引起显著干扰的细胞。这些细胞包括:
大多数未刺激的免疫细胞:
许多细胞系:
特定的组织或细胞类型:
重要警示:“不表达”是相对的,而非绝对的。 实验前的验证至关重要。
知道哪些细胞“安全”,同样需要知道哪些细胞“危险”。以下细胞类型因其高代谢活性而富含内源性生物素化蛋白,极易产生高背景:
如果您的实验对象是这些组织,使用生物素系统时需要格外小心。
如果您研究的细胞恰好内源性生物素水平很高,或者实验结果出现了无法解释的高背景,可以采取以下策略:
进行预实验验证:
使用链霉亲和素/亲和素阻断试剂盒:
选择替代的检测系统:
优化实验流程:
回到最初的问题——“不表达生物素受体的是什么?”——更准确的表述是“内源性生物素水平低、不会干扰生物素-链霉亲和素系统的细胞是什么?”
答案是:大多数静息状态的免疫细胞(如淋巴细胞)和许多常用细胞系(如HEK293, HeLa)的内源性生物素水平很低,适合使用该检测系统。 而代谢高度活跃的细胞,如肝细胞、肾细胞和脂肪细胞,则内源性生物素水平很高,需要采取封闭或替代方案。