标记生物素凝集素是将凝集素(lectin)与生物素(biotin)共价结合形成的复合物,结合了凝集素特异性识别糖基的能力和生物素-亲和素系统的高灵敏度检测优势。这种标记技术为糖生物学研究提供了强大工具,能够帮助研究人员检测、定位和定量分析细胞表面的糖复合物。
生物素-亲和素系统以其极高的亲和力著称(Kd=10^-15 M),每个亲和素分子可以结合四个生物素分子,这种特性实现了信号级联放大,大幅提高了检测灵敏度,特别适合检测低丰度的糖基化目标。
标记生物素凝集素可与多种检测系统兼容:
生物素化凝集素通常具有较好的稳定性,可在4℃条件下保存较长时间而不影响活性,避免了荧光标记凝集素的淬灭问题。
每种凝集素的最佳工作浓度需通过预实验确定,建议进行浓度梯度测试(0.1, 1, 5, 10 μg/mL),选择信噪比最高的浓度。
不同凝集素识别特定的糖基结构:
根据研究目标选择合适的凝集素,对于未知样本,建议使用凝集素芯片进行初步筛选。
若遇到高背景或非特异性结合:
严谨的实验必须设置以下对照:
利用标记生物素凝集素可检测癌症、炎症性疾病中糖基化模式的改变,如核心岩藻糖基化增加与肝细胞癌的相关性。
特定糖基化模式可作为干细胞多能性标志物,如SSEA-3/4的糖脂抗原检测。
研究细菌、病毒通过糖-蛋白质相互作用侵入宿主细胞的机制。
近年来,标记生物素凝集素技术与其他先进方法结合,产生了更多创新应用: