sa和生物素结合后如何保存

链霉亲和素-生物素复合物保存全攻略：确保实验稳定与成功

在免疫学、分子生物学和细胞检测等众多实验领域中，链霉亲和素（Streptavidin, SA）与生物素（Biotin）之间的高亲和力、高特异性结合是许多关键技术的基石（如ELISA、免疫组化、流式细胞术、Pull-down等）。然而，一旦两者成功结合，如何正确保存其复合物以维持稳定性和生物活性，是确保实验结果可靠、可重复的关键步骤。本文将详细阐述SA-生物素复合物的保存原则、具体方法和注意事项。

一、 理解复合物的特性：为什么保存如此重要？

链霉亲和素和生物素的结合近乎不可逆，解离常数（Kd）极低（约10^-14 M），这意味着一旦结合就非常稳定。但是，这并不代表复合物可以随意存放。 我们需要保护的不仅仅是两者的结合，更是链霉亲和素蛋白本身的活性。不当的保存条件会导致蛋白：

• 变性失活：失去与其他生物素化分子结合的能力。
• 聚集沉淀：形成不溶的聚集体，影响均一性和功能。
• 微生物污染：导致样品降解报废。

因此，保存的目标是最大限度地维持SA蛋白的天然构象和活性。

二、 核心保存原则与具体方法

保存SA-生物素复合物（例如：SA包被的磁珠、SA标记的荧光探针、捕获了生物素化抗体的SA板等），需遵循以下四大核心原则：

1. 低温保存
低温是减缓所有生化反应速度、防止蛋白变性和微生物生长的最有效手段。

• 短期保存（1周内）：建议存放在 4°C 冰箱。这是最常用的短期保存条件，适用于正在进行的实验或近期会使用的试剂。
• 长期保存（1个月以上）：必须存放在 -20°C 甚至 -80°C 超低温冰箱。低温冻存可以极大地延长样品的有效期。

2. 避免反复冻融
反复冻融会产生冰晶，对蛋白结构造成机械损伤，并导致复合物解离或聚集，是活性丧失的主要原因。

• 最佳实践：分装！ 在保存前，将复合物溶液分装成单次实验用量的小份（如0.5 mL离心管或冻存管）。
• 操作流程：每次实验时只取出一管使用，用后弃去剩余部分，绝不重新冷冻再次使用。未使用的分装管始终保持冷冻状态。

3. 使用适宜的保存缓冲液
缓冲液的环境对蛋白稳定性至关重要。纯水或不当的缓冲液会导致蛋白失活。

• 理想缓冲液：通常使用中性pH（7.2-7.4）的磷酸盐缓冲液（PBS） 或 Tris-HCl缓冲液。
• 添加稳定剂：
  • 蛋白保护剂：添加 0.1%-1% BSA（牛血清白蛋白） 或 5% 脱脂奶粉。它们可以占据容器表面的蛋白结合位点，防止SA蛋白非特异性吸附而损失。
  • 防腐剂：为防止微生物生长，尤其在4°C保存时，可添加 0.02%-0.05% 叠氮化钠（Sodium Azide）。【重要警告】：叠氮化钠有毒，且会抑制多种酶活性（如HRP）。如果后续实验涉及酶联反应，应避免使用，可改用无毒的 ProClin™ 300 等防腐剂。
  • 防止冻存损伤：对于需要冻存的样品，可添加 50% 甘油，它能大大降低冰点，减少冰晶形成，起到“防冻剂”的作用。Alternatively，也可使用专业的无血清细胞冻存液。

4. 避光保存
如果SA复合物上连接了荧光染料（如FITC、PE、Cy系列等），光照会导致荧光淬灭，降低信号强度。

• 必须使用 棕色避光管 或用铝箔纸包裹容器，在所有保存和操作步骤中尽可能避光。

三、 不同形式的复合物保存要点

• SA包被的微板（ELISA板）：

  • 反应结束后，吸弃孔内液体。
  • 用密封膜彻底密封板口，防止水分蒸发和污染。
  • 短期存放于4°C（1-2周），长期建议在干燥的密封袋中于-20°C冻存。

• SA磁珠/琼脂糖珠：

  • 将珠子重悬在含有防腐剂（如0.05%叠氮钠）和BSA的PBS缓冲液中。
  • 置于4°C保存。切忌冷冻，因为冷冻会破坏珠子的多孔结构，导致破裂和性能丧失。

• SA标记的抗体或荧光探针（液体形式）：

  • 分装后，添加BSA和防腐剂。
  • 根据使用频率，存放于4°C（频繁使用）或-20°C（长期保存），并严格避光。

四、 质量控制：使用前必检

即使按照最佳方案保存，在使用前（尤其是长期保存后）进行简单的质量验证也是明智之举。

• 方法：取出一小份保存的样品，与已知浓度的生物素化分子（如生物素化IgG）进行结合实验，然后通过ELISA、WB等方法检测信号强度，与新鲜制备的复合物或标准品对比，确认其活性没有显著下降。

总结

保存SA-生物素复合物的黄金法则是：“分装、加保护、避光、严控温”。

1. 分装：避免反复冻融。
2. 加保护：使用含BSA和适当防腐剂（如叠氮钠，注意兼容性）的中性缓冲液。
3. 避光：特别是荧光标记的复合物。
4. 严控温：根据保存时长选择4°C（短期）、-20°C或-80°C（长期）。