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还在为生物素探针杂交法的繁琐步骤和易错点烦恼吗？本文为您整理了一份朗朗上口的“口诀一览表”，并附上详细解释，帮助您从原理到应用，快速掌握这项关键技术。
我们首先将整个流程的精髓浓缩成以下口诀，方便您记忆和查阅。
| 步骤 | 核心口诀 | 口诀释义与目的 |
|---|---|---|
| 1. 准备与固定 | 样品处理要干净，固定牢固不变性 | 确保样本（如细胞、组织）无污染，并通过固定（如多聚甲醛）保持目标核酸/DNA的原始结构和位置，防止降解。 |
| 2. 探针标记 | 探针标记生物素，特异结合是根本 | 设计并制备与目标序列互补的核酸探针，并用生物素（Biotin）进行标记。探针的特异性是成功的关键。 |
| 3. 预杂交与杂交 | 预杂交要封背景，杂交条件需严谨 |
预杂交：用不含探针的杂交液封闭非特异性位点，降低背景噪音。 杂交：在精确的温度、离子强度下，让标记探针与目标序列特异性结合。 |
| 4. 洗脱 | 洗脱严格分等级，去伪存真留特异 | 使用不同严格度（温度、盐浓度）的缓冲液洗脱，逐步去除未结合及非特异性结合的探针，只留下完美匹配的杂交体。 |
| 5. 信号放大与检测 | 链霉亲和素来结合，酶联显色或发光 |
信号放大：生物素与链霉亲和素（Streptavidin）高亲和力结合，后者耦联有报告酶（如HRP）。 检测：加入酶底物，产生不溶性的有色沉淀（显色）或化学发光信号，以便观察。 |
| 6. 结果观察 | 镜下观察定位准，对照齐全结果稳 | 在显微镜下观察信号位置，判断目标分子的分布。必须设立阳性和阴性对照，确保实验结果的可靠性。 |
仅仅记住口诀还不够，理解其背后的原理和细节才能万无一失。
1. 准备与固定：“样品处理要干净，固定牢固不变性”
