在免疫组化、免疫荧光等实验技术中，内源生物素的干扰是许多研究者面临的常见问题。本文将全面解析封闭内源生物素的原理、操作方法和解决方案，帮助您获得更准确的实验结果。
内源生物素是指生物体内天然存在的生物素分子，主要分布在肝脏、肾脏、乳腺、脑组织等特定组织和细胞中。生物素是一种水溶性B族维生素（维生素B7），作为多种羧化酶的辅酶参与细胞代谢。
在基于生物素-亲和素系统（BAS）的检测方法中，内源生物素会与实验中外源添加的亲和素或链霉亲和素结合，导致非特异性染色，产生假阳性结果。这种干扰会严重影响实验的准确性和可靠性，尤其在使用高灵敏度检测方法时更为明显。
内源生物素封闭的基本原理是使用外源亲和素或链霉亲和素预先与组织中的内源生物素结合，然后通过添加过量游离生物素饱和这些结合位点，从而阻止它们与后续检测系统中的标记亲和素结合。
这种方法基于生物素与亲和素之间极高亲和力（Kd=10-15M）的特性，一旦内源生物素被封闭，就不会再干扰后续的实验步骤。
样品准备
内源酶灭活
第一次封闭
第二次封闭
