生物素影响流式吗

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生物素会影响流式结果吗？一文为您全面解析与解决方案

在进行流式细胞术实验时，任何一个微小的细节都可能对结果产生重大影响。许多研究者，尤其是在进行免疫学研究或使用某些商品化试剂盒时，都会遇到一个共同的问题：生物素是否会影响我的流式数据？

答案是：会的，而且影响可能非常显著。 如果您忽略了这一点，很可能导致实验结果出现假阴性、背景升高甚至完全错误的结论。本文将深入探讨生物素如何影响流式检测，并提供一套完整的解决方案。

一、 核心原理：为什么生物素会干扰流式实验？

要理解这个问题，我们首先要了解流式细胞术中一种非常普遍的检测系统——生物素-链霉亲和素系统。

1. 强大的结合能力：生物素（维生素B7）与链霉亲和素（或普通亲和素）之间具有极高的亲和力（Kd ≈ 10^-15 M），这种结合力比大多数抗原-抗体反应还要强百万倍。因此，该系统被广泛用于信号放大，提高检测的灵敏度。
2. 常见应用场景：
   • 多色 panel 中的二抗：在涉及多个标记物的实验中，研究者可能会使用生物素化的初级抗体，然后再用偶联了荧光染料的链霉亲和素进行检测。
   • 预偶联的抗体：许多商品化的流式抗体，本身就使用了生物素-链霉亲和素系统进行信号放大。
   • 检测试剂：某些细胞因子检测、增殖检测的试剂中也含有生物素组分。

干扰的产生：当实验动物或细胞培养体系中存在外源性的高剂量生物素时，这些游离的生物素会抢先与流式试剂中的链霉亲和素结合。这会导致：

• 信号阻断：荧光染料无法通过链霉亲和素连接到目标抗体上，导致目标蛋白的信号显著减弱甚至消失（假阴性）。
• 背景升高：非特异性结合也可能发生，导致信噪比下降。

二、 生物素的主要来源：您的干扰从何而来？

了解来源是解决问题的第一步。生物素的干扰主要来自以下几个方面：

1. 

   动物饲料与饮用水：

   • 这是最常见且最容易忽视的来源。许多商业啮齿动物饲料中会添加高剂量的生物素，以促进动物生长和保持皮毛健康。这些生物素会在实验动物（如小鼠、大鼠）的血清和组织中积累，达到足以干扰实验的浓度。

2. 细胞培养体系：

   • 标准的细胞培养血清（如胎牛血清 FBS）中含有一定量的生物素。虽然在常规培养中浓度通常不足以造成干扰，但在使用特殊培养基或长时间培养时，可能需要考虑其影响。

3. 实验性补充：

   • 在某些代谢、基因表达或疾病模型研究中，研究人员会故意给动物或细胞添加高剂量的生物素，这无疑会带来严重的干扰。

4. 人体样本：

   • 对于临床流式检测（如检测人外周血样本），如果受试者正在服用高剂量的生物素补剂（常用于改善头发、皮肤和指甲），其血浆中的生物素浓度可能异常升高，从而影响以生物素-链霉亲和素系统为基础的诊断性流式检测，导致错误的临床解读。

三、 如何判断与解决生物素干扰问题？

如果您怀疑自己的流式结果受到了生物素的影响，可以遵循以下流程进行排查和解决：

第一步：判断是否存在干扰

• 典型症状：