蛋白质巯基生物素化是一种特异的生物化学标记技术，它利用生物素试剂与蛋白质中的巯基（-SH）发生特异性反应，将生物素分子共价连接到蛋白质上。这一技术因其高度的特异性和灵敏度，已成为现代生命科学研究中不可或缺的工具。
与普通的赖氨酸生物素化不同，巯基生物素化专门针对蛋白质中的半胱氨酸残基，这使得它能够实现更精确的位点特异性标记，特别适用于研究含有游离巯基的蛋白质。
蛋白质巯基生物素化的核心反应是生物素化试剂与蛋白质中半胱氨酸残基的巯基之间的特异性结合。目前最常用的试剂是马来酰亚胺类生物素试剂，其反应机制如下：
这一反应通常在pH 6.5-7.5的中性至弱碱性条件下进行，避免与其他氨基酸残基发生非特异性反应。
样品准备阶段：
生物素化反应：
结果验证：
