在流式细胞术领域，带生物素的抗体已成为一种强大而灵活的工具，为研究人员提供了更多的实验设计可能性。无论您是刚刚接触这一技术，还是希望优化现有实验方案，本文将全面解析带生物素的流式抗体的核心知识点，帮助您更好地理解和应用这一重要工具。
生物素-链霉亲和素系统是免疫检测中最强大的结合系统之一，其卓越的性能源于以下几个特点：
超高亲和力：链霉亲和素与生物素的结合常数高达10^15 M^-1，是目前已知最强的非共价相互作用之一，比抗原-抗体反应强100万至1000万倍。
高度特异性：这种结合具有极高的特异性，能有效降低实验中的非特异性背景。
多价性：每个链霉亲和素分子能结合四个生物素分子，允许信号放大和多元检测。
在流式细胞术中，这一系统通常采用间接检测方法：首先使用生物素化的一抗或二抗与靶标结合，然后加入链霉亲和素连接的荧光染料进行检测。
对于低丰度抗原，生物素-链霉亲和素系统能提供显著的信号放大。每个生物素化抗体可以结合多个链霉亲和素分子，而每个链霉亲和素又能连接多个荧光染料分子，从而大幅增强检测信号。
使用生物素化抗体，研究人员可以：
购买一种生物素化抗体，可以通过与不同的链霉亲和素-荧光染料结合物配对，用于多种检测场景，减少了需要储备的荧光直接偶联抗体数量。
无论是生物素化抗体还是链霉亲和素-荧光染料结合物，都必须进行仔细的滴定优化。使用过量试剂不仅浪费，还可能增加背景信号。
推荐滴定方法：
为避免非特异性结合，实验过程中需要加入封闭步骤：
基本封闭流程：
在设计多色流式面板时，需注意：
可能原因：
解决方案：
在10色以上的高参数实验中，生物素化抗体特别有价值：
对于检测频率极低的细胞群体，生物素-链霉亲和素系统的信号放大特性特别有利，能提高检测灵敏度。
进行转录因子或细胞因子染色时，生物素化抗体能提供更强的信号，有助于区分弱阳性群体。
虽然生物素-链霉亲和素系统功能强大，但也需了解其替代方案：
直接偶联抗体：
荧光蛋白标记：
其他放大系统：
保存条件：生物素化抗体应避免反复冻融，链霉亲和素-荧光染料结合物需避光保存
对照设置：每次实验都应包括：
样品处理：
仪器校准：定期使用校准微球确保仪器性能稳定
带生物素的流式抗体是流式细胞术工具箱中不可或缺的一部分，正确理解和应用这一系统能够显著提高实验的灵敏度、灵活性和效率。通过优化实验条件、合理设计对照和仔细分析结果，研究人员可以充分利用这一强大工具，获得可靠且有意义的科学数据。
注册账号 | 忘记密码
