生物素(biotin)与抗生物素(avidin)及其衍生物链霉抗生物素(streptavidin)之间的相互作用是生物化学和分子生物学研究中最强大的非共价结合对之一。这种相互作用具有极高的亲和力(KD≈10^-15M),比大多数抗原-抗体反应高出数百至数千倍。然而,在许多实验应用中,我们需要可控地解离这种复合物,这就引出了生物素与抗生物素解离技术的研究。
在亲和层析中,生物素化的分子通过抗生物素柱被捕获,随后需要将目标分子从柱上解离下来,同时保持其生物活性。
生物传感器、芯片或其他检测装置使用生物素-抗生物素系统固定探针后,可能需要解离以便重复使用昂贵的检测平台。
在某些分析实验中,过强的结合可能干扰检测信号,需要适度削弱或解离复合物以获得最佳检测窗口。
当生物素标记的样品被意外捕获或需要重新分析时,解离过程变得必要。
变性剂方法:
极端pH条件:
生物素类似物竞争法:
热变性法:
变性电泳:
选择适当的解离方法需考虑以下因素:
市场上已有多种可切割生物素衍生物,可在特定条件下断裂:
通过蛋白质工程改造的抗生物素变体,具有降低的亲和力或条件敏感性,如:
问题1:解离效率低
解决方案:尝试组合方法,如中等变性剂加上温和加热,或延长解离时间
问题2:目标分子失活
解决方案:改用更温和的方法,如竞争性解离或可切割生物素,优化解离后处理
问题3:非特异性结合
解决方案:在解离缓冲液中加入适量去垢剂(如0.1% Tween-20)或提高离子强度