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在免疫检测、分子探针标记、靶向药物递送等生命科学和医学研究领域,生物素-链霉亲和素系统因其超高亲和力(Kd ~ 10^-15 M)和特异性而成为不可或缺的工具。然而,在实验过程中,一个关键问题常常困扰着研究人员:我成功地将生物素标记到我的目标分子(如抗体、核酸)上了吗?后续与链霉亲和素的连接是否有效?
用户搜索“生物素与链霉亲和素连接的四种判断方法”,其核心需求可以归结为以下几点:
针对这些需求,下面将详细解析四种最常用、最可靠的判断方法,助您精准验证连接效果。

这是最经典、应用最广泛的方法,特别适用于验证生物素标记的抗体或其他蛋白质的活性。
原理:将已知的、未经生物素标记的目标蛋白(如抗原)直接包被在酶标板上。然后依次加入:
操作步骤:
结果判读:

优点:灵敏度高、可定量、通量高,能同时验证生物素标记物的功能活性。
缺点:过程较为繁琐,耗时较长。
该方法主要用于验证生物素标记的核酸(如DNA、RNA探针),通过电泳迁移率的变化来直接判断。
原理:链霉亲和素是一个四聚体蛋白,分子量约为60 kDa。当它与生物素标记的核酸探针结合后,会形成一个巨大的复合物,导致其在非变性聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶中的迁移速率显著慢于未结合的游离探针。

操作步骤: