在生命科学和病理学研究的众多技术中,免疫组织化学(IHC)是定位和可视化特定蛋白质的关键手段。而当您搜索“d生物素包埋剂”这个关键词时,您很可能正在为一项关键的实验步骤——冷冻组织包埋——寻找解决方案。本文将为您全面揭开d生物素包埋剂的神秘面纱,解答您所有的疑问。
简单来说,d生物素包埋剂是一种专门用于冷冻组织切片前的临时支撑和填充剂。
它的核心成分是蔗糖和OCT包埋剂,并在此基础上添加了特定浓度的d-生物素。其工作原理如下:
综上所述,d生物素包埋剂是一种三合一的功能性介质:它既能像普通OCT一样提供包埋支撑,又能像蔗糖一样保护细胞结构,更重要的是,它能预先阻断内源性生物素,从根本上消除IHC实验中的一大背景干扰源。
您搜索并了解它的根本原因,很可能是因为在之前的IHC(尤其是冰冻切片IHC)实验中遇到了以下问题:
这些问题的元凶之一就是内源性生物素干扰。在许多组织(如肝脏、肾脏、乳腺、脑组织等)中,天然存在高水平的生物素。在基于生物素-链霉亲和素系统的IHC检测中(这是最经典的放大系统),试剂中的链霉亲和素不仅会结合标记在抗体上的生物素,也会去结合组织自身的生物素,从而产生强烈的背景信号。
而d生物素包埋剂正是在样品制备的最前端巧妙地解决了这个问题。在包埋过程中,大量的游离d-生物素会预先占据组织中的内源性生物素结合位点。等到后续进行IHC实验时,试剂中的链霉亲和素已经没有多余的空位再去结合内源性生物素,只能与抗体上标记的生物素结合,从而大大提高了信噪比,获得了干净、特异的染色结果。
d生物素包埋剂并非用于所有实验,它的应用具有很强的针对性:
注意:对于石蜡切片,由于在脱水、透明、石蜡包埋等过程中内源性生物素已被大部分破坏或掩盖,通常采用过氧化氢阻断内源性过氧化物酶,并在抗体孵育前使用专门的生物素阻断剂进行阻断,而非在包埋阶段使用d生物素包埋剂。
使用d生物素包埋剂需要遵循一定的步骤,与普通OCT包埋略有不同:
关键提示:使用商品化的d生物素包埋剂时,请务必阅读产品说明书,因为不同品牌的浓度和推荐流程可能略有差异。
优点:
缺点:
选购建议: