生物素怎么滤菌

作者：小编更新时间：2025-11-18

好的，我们来撰写这篇关于生物素滤菌的全面指南。

生物素

在分子生物学、细胞培养和生物化学实验中，生物素（维生素B7）是常用的添加剂。但您是否曾有过疑问：购买的生物素粉末如何配制成无菌溶液以备使用？直接高压灭菌会不会破坏其活性？“生物素怎么滤菌” 这个问题的背后，正体现了研究者对实验细节和试剂稳定性的高度重视。

本文将彻底解答您关于生物素滤菌的所有疑问，包括操作步骤、注意事项以及背后的科学原理，确保您能安全、高效地制备无菌生物素溶液。

直接答案：因为生物素对热不稳定。高压灭菌（通常121°C，15-20分钟）的高温会破坏生物素的分子结构，导致其生物活性丧失或显著降低。

背后的科学原理：生物素是一种水溶性维生素，其分子结构中的脲基环和硫原子等部分在高温下可能发生降解或构象变化。一旦结构被破坏，它就失去了作为辅酶参与羧化、固定二氧化碳等关键生物反应的能力。添加到培养基中也就失去了意义。
因此，过滤除菌是制备无菌生物素溶液的“唯一推荐方法”。该方法在常温或低温下进行，利用微孔滤膜物理截留细菌、真菌等微生物，完美保留了生物素的化学和生物活性。

生物素

请遵循以下步骤，确保操作的无菌性和溶液的有效性。

所需材料和设备：

生物素粉末
溶剂：最常用的是超纯水、PBS缓冲液或NaOH稀溶液（如0.1M或1M）。生物素在水中溶解度较低，先用少量稀碱（如1-10 μL 1M NaOH）助溶，再用水或缓冲液稀释至工作浓度，是标准做法。
无菌注射器（规格根据溶液体积选择，如10mL、50mL）
无菌针头式滤膜（孔径 0.22μm，这是除菌过滤的标准孔径）
接收容器（如无菌离心管、血清瓶）
天平、pH试纸或pH计、搅拌子/涡旋振荡器

操作步骤：

配制溶液：
- 称取所需量的生物素粉末。
- 先加入极少量稀NaOH溶液（例如，配制10mL 1mg/mL的储备液，可先加10μL 1M NaOH），涡旋或轻轻搅拌至粉末完全溶解。生物素在碱性条件下溶解度更高。
- 然后加入剩余体积的溶剂（如水或PBS），定容至目标体积，混匀。此时溶液是非无菌的。
组装过滤装置：
- 在超净工作台或洁净的环境中，打开无菌注射器和无菌针头式滤膜的包装。
- 将注射器筒与滤膜单元连接，无需安装针头（滤膜出口本身就是无菌的）。
进行过滤：
- 将配制好的生物素溶液吸入注射器。
- 将滤膜出口对准无菌接收容器的开口。
- 缓慢而稳定地推动注射器活塞，将溶液通过0.22μm滤膜压入接收容器中。注意：推力过猛可能导致滤膜损坏或溶液飞溅。
分装与储存：
- 过滤完成后，立即盖紧接收容器的盖子。

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