生物素怎么配成溶液的

作者：小编更新时间：2025-09-24

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### 生物素溶液配制全攻略：从称量到保存的保姆级教程

生物素，又称维生素B7或维生素H，是生命科学研究和体外诊断试剂研发中常用的水溶性维生素。无论是进行细胞培养、酶学实验，还是制备检测试剂，第一步往往都是将粉末状的生物素配制成准确浓度的溶液。本文将为您详细解析生物素溶液的配制方法，并解答常见问题，确保您能成功获得稳定可用的溶液。

#### 一、核心配制步骤（以常用浓度为例）

生物素在水中的溶解度不高（约0.22 mg/mL，25°C），因此通常配制成较低浓度的储备液。以下是配制 **1 mg/mL (约0.4 mM)** 储备液的详细步骤，您可以根据需要按比例缩放。

**所需材料与仪器：**

* **生物素粉末：** 高纯度（如≥99%）

* **溶剂：** 超纯水（ddH₂O）、稀碱溶液（如0.1M NaOH）或DMSO

* **天平：** 分析天平（精度0.1 mg）

* **容器：** 烧杯、容量瓶（如50mL或100mL）

* **pH计：** （可选，用于精确调节pH）

* **搅拌器：** 磁力搅拌器或涡旋振荡器

* **过滤除菌装置：** 0.22μm微孔滤膜及注射器

* **储存瓶：** 棕色玻璃瓶或无菌离心管

**操作流程：**

1. **计算与称量：**

* **计算：** 根据目标浓度和体积计算所需生物素质量。例如，配制50 mL浓度为1 mg/mL的溶液，需要生物素质量为：1 mg/mL × 50 mL = 50 mg。

* **称量：** 使用分析天平，精确称取50.0 mg生物素粉末。称量时注意环境干燥，避免粉末吸潮。

2. **溶解：** 这是最关键的一步，根据选择的溶剂有不同的方法。

* **方法A：使用超纯水（推荐用于多数水相体系）**

* 将称好的生物素粉末转移至烧杯中。

* 先加入约40 mL的超纯水。

* **由于生物素在水中溶解较慢，溶液可能呈微弱酸性而不易完全溶解。此时可逐滴加入少量稀碱溶液（如0.1M NaOH），并持续搅拌，直至粉末完全溶解。** 注意不要加入过量碱，避免生物素在强碱条件下降解。使用pH计监测，将pH调节至7.0左右为宜。

* 此方法是**部分用户遇到“生物素不溶于水”问题时的解决方案**。

* **方法B：使用DMSO（适用于需要高浓度储备液或细胞穿透实验）**

* 直接将生物素粉末溶于适量DMSO中，非常容易溶解，可配制成10-50 mg/mL甚至更高浓度的储备液。

* **注意：** 后续用于细胞实验时，需控制工作液中DMSO的最终浓度（通常<0.1%），以避免对细胞产生毒性。

3. **定容与混合：**

* 将步骤2中得到的溶液全部转移至50 mL容量瓶中。

* 用选择的溶剂（水或DMSO）反复冲洗烧杯内壁，并将冲洗液也倒入容量瓶，确保所有溶质转移。

* 最后缓慢加溶剂至容量瓶的50 mL刻度线，盖紧瓶盖，充分颠倒混匀。

4. **过滤除菌与分装：**

* 对于细胞实验，溶液必须无菌。使用0.22μm滤膜对溶液进行过滤除菌。

* 将除菌后的溶液分装到无菌的棕色储存瓶或离心管中。**分装可以避免反复冻融对生物素活性的影响。**

5. **标记与储存：**

* 在瓶身上清晰标记：**溶液名称（生物素）、浓度（1 mg/mL）、配制日期、溶剂类型、配制人**。

* **储存条件：** 置于**-20°C** 冷冻保存。生物素水溶液在避光、-20°C条件下通常可稳定保存数月。DMSO溶液需注意防潮。

#### 二、常见问题与解决方案（QA）

1. **问：生物素为什么难溶于水？怎么办？**

* **答：** 生物素本身在水中的溶解度有限，且其羧基在纯水中会质子化，影响溶解。**解决方案就是如上所述，用少量稀碱（如NaOH）中和其羧基，形成生物素钠盐，溶解度会显著提高。** 这是配制成功的关键技巧。

2. **问：应该用什么浓度的NaOH来助溶？**

* **答：** 推荐使用低浓度的NaOH，如0.1M或1M。操作要点是 **“逐滴加入”** ，边加边搅拌，一旦溶液变清亮表明已溶解，应立即停止。通常配制1 mg/mL的溶液，每50mg生物素只需加入几十到一百微升的0.1M NaOH即可。

3. **问：配制好的生物素溶液能保存多久？**

* **答：** 稳定性受浓度、溶剂、温度和光照影响。**-20°C避光保存**的水溶液（1 mg/mL）一般可稳定3-6个月。DMSO溶液更稳定，但需密封防潮。建议分装保存，并避免反复冻融。

4. **问：如何将储备液稀释到工作浓度？**

* **答：** 使用无菌水或您实验所需的缓冲液（如PBS）进行稀释。例如，将1 mg/mL的储备液稀释1000倍，即可得到1 μg/mL的工作液。计算公式为：`C1V1 = C2V2`。

#### 三、浓度换算小贴士

生物素的分子量为244.31 g/mol。

* **质量浓度转摩尔浓度：** 1 mg/mL ≈ 1000 mg/L ÷ 244.31 g/mol ≈ **4.09 mM**

* **摩尔浓度转质量浓度：** 1 mM = 1 mmol/L × 0.24431 g/mmol = **0.244 mg/mL**

#### 总结

成功配制生物素溶液的核心在于理解其溶解特性并采用正确的助溶方法。对于水相应用，**使用稀碱助溶**是解决溶解问题的金钥匙。牢记**精确称量、温和助溶、过滤除菌、分装冻存**这几个原则，您就能轻松获得高质量、稳定的生物素溶液，为后续实验的顺利进行奠定坚实基础。

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