食品中生物素（维生素B7或维生素H）的测定是评估食品营养品质、监控生产工艺以及保障消费者知情权的重要环节。对于从事食品检测、品质控制、产品研发等相关行业的专业人员而言，熟练掌握其国家标准方法至关重要。本文将对《食品安全国家标准 食品中生物素的测定》（GB 5009.259-2016）进行全面深入的解读，旨在解答您对该标准的所有核心疑问。
该标准适用于各类食品中生物素的测定，包括但不限于：
国标GB 5009.259-2016采用的是 微生物法。
1. 基本原理： 利用一种对生物素特异敏感的微生物——植物乳杆菌 作为检测工具。该菌株的生长繁殖程度与培养基中生物素的含量在一定浓度范围内存在直接的定量关系。生物素含量越高，菌株生长越旺盛。
2. 检测指标： 通过测量微生物代谢产生的酸度（以pH值变化或滴定耗酸量来间接反映菌株的生长量），从而计算出样品中生物素的含量。
为什么选择微生物法？ 虽然高效液相色谱（HPLC）等方法也能用于测定，但微生物法是经典、特异且灵敏度极高的方法，尤其适用于成分复杂的食品基质，被国际公认为测定B族维生素的基准方法。
测定过程主要包括以下几个关键阶段：
1. 样品前处理：
2. 标准曲线制备： 准确配制一系列已知浓度的生物素标准工作液，作为定量基准。
3. 接种与培养： 在无菌条件下，向一系列试管中分别加入标准溶液和样品测试液，然后接种统一的植物乳杆菌菌悬液。在37℃ 下培养16-24小时。
4. 测定与计算： 培养结束后，通过滴定法测定每个试管中培养液的酸度。以标准溶液系列的生物素浓度对滴定耗碱量（或透光率）绘制标准曲线，最后根据样品管的测定值，从标准曲线上查得并计算出样品中生物素的最终含量。
标准中规定了方法的性能指标，实验室需通过验证确保其测定符合要求：
除了国标推荐的微生物法，市面上也可能见到：
结论：微生物法仍然是目前国标认定的金标准方法，因其特异性强、准确度高，尤其适用于仲裁检验和营养标签的合规性验证。
Q1: 标准文本在哪里可以下载？ A: 最权威的渠道是国家卫生健康委员会的官方网站或“食品安全国家标准数据检索平台”。此外，一些标准查询服务平台（如工标网、食品伙伴网）也提供官方文本的付费下载。
Q2: 实验室需要哪些设备和试剂？ A: 关键设备包括：高压灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、pH计、滴定管（或自动滴定仪）等。关键试剂包括：生物素标准品、植物乳杆菌菌种、特定培养基成分（如番茄汁、蛋白胨、葡萄糖等）、指示剂等。
Q3: 如果样品脂肪含量很高怎么办？ A: 对于高脂肪样品（如坚果、肝脏），在前处理阶段可能需要先进行脱脂处理，常用乙醚或石油醚进行索氏提取脱脂，然后再进行酸水解，以避免脂肪对提取和后续微生物测定的干扰。
总结：
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